생체내 시험의 종류

6.2 생체내(in vivo) 시험

 

결정하는 전통적 방법은 독성이 의심되는 화학물질을 한 종 스 종의 실험동물을 대상으로 투여한 다음, 급성독성은 치사 화학물질의 독성을 결정하는 전 토지의 실험동물 혹은 다수 종의 실험동물을 관찰하며, 만성독성은 각종 조직의 병리 시험 결과를 통하여 인간에 대한 위청 표적 기술이 외삽이다.

 

현재 외삽기술이 학 물질에 대한 독성평가를 위하여 동물이 필요하다는 점과 실험에 많 시간이 소요된다는 점에서 단전 여 즉 실험동물을 이용하는 독성 기체 되고 있는 실정이다. 인간에 대한 위해성을 평가할 수 있는데 여기에 사용되는 대 사이다. 현재 외삽 기술이 많은 장점을 제공하기 때문에 인간의 독성평가를 위하여 광범위하게 사용하고 있다. 그러나 많은 실험 다는 점과 실험에 많은 경제적 비용이 든다는 점 그리고 상당한 느 점에서 단점 역시 만만치 않다. 따라서 현재는 생체내 시험 - 이요하는 독성시험들 은 전문화된 시험관내 방법으로 보완·

 

6.2.1 급성독성시험

 

급성독성시험은 보편적으로 II 1천은 보편적으로 LD50 또는 LC50을 통한 치사율 측정이 일반적이지 시험 또는 피부자극시험도 급성독성시험에 응용할 수 있다. 계장에서 이미 설명한 바와 같이 독성물질을 정해진 조건하에서 실험

 

(1) LDso 및 LC5o 시험

 

LDso은 제2장에서 이미 성 동물에 직접적으로 투여할 것으 LC5o은 해당 동물의 50%가 조 진으로 투여할 경우 해당 동물의 50%가 사망할 때의 용량을 말하며, 다도물의 50%가 죽는 농도를 나타낸다. LD50 시험은 아래와 같은 한계 제6장 독성 시험법 183을 내포하고 있다. > 다른 급성 영향을 반영하지 않고 오직 치사율만을 표시하고 있다. > 통계적으로 신뢰성 있는 자료를 얻기 위해서는 많은 동물수가 필요하다. • LD50 값은 종, 혈통, 성별, 연령 등에 따라 달라지기 때문에 서로 다른 조건의 을 사용할 경우 실험실마다 결과치가 서로 다를 수 있다(표 6.5 참조). ·규제 목적을 위한 가장 중요한 정보인 만성독성에 대한 정보를 거의 얻지 못한 인간에 대한 외삽 시 신뢰성이 낮다.

 

그러나 이러한 단점에도 불구하고 다음과 같은 필요성에 의해 LD50 시험은 계 이루어지고 있다. 급성독성시험을 적절히 시행하면 LD50뿐만 아니라 사망원인, 사망시간, 증후 비치사적 급성효과, 손상받은 기관, 비치사적 가역 반응 등과 같은 급성 영향 정보를 얻을 수 있다. 독성 및 해독기 전에 대한 정보를 치사율 곡선을 통하여 알 수 있다. 급성독성시험 결과는 아만 성독 성 연구의 기초자료가 될 수 있다. 급성독성시험 결과는 작업장 근로자의 일차적 위해성 예측에 유용하다. 급성독성시험은 단시간 내에 끝낼 수 있다. 너한 장점으로 인하여 최근에는 급성 독성시험의 개념 수정에 노력을 기울 이 으며 특히 적은 수의 실험동물을 사용하여 유의성이 있는 자료를 얻을 수 시험방법들이 개발되고 있는 실정이다. 결론적으로 급성독성시험은 새로운 화학물질에 대한 위해성 평가와 환경 중의 자연적 혹은 인위적으로 배출되는 물질의 관리를 위해 매우 중요하다.

 

(2) 눈자극시험

 

화학물질의 눈에 대한 독성은 실명 가능성으로 인하여 오래전부터 관심의 대 상이 되어 왔다. 비록 눈의 독성은 전신 독성으로 인한 영향을 배제할 수는 없지 만 국소 독성시험법으로는 가장 적합하다. 현재 주로 통용되는 모든 시험은 Drazie시험을 변형한 것으로서 백색 토끼가 실험동물로 사용된다. 시험방법은 수 마리 토끼를 선정한 다음 두 눈 중에 한쪽 눈은 대조용으로 두고 나머지 눈의 결막낭에 직접 시험물질을 투여하는 것이다.

 

적어도 24시간 이후에 눈을 씻고 1 일, 2일, 3일 후의 눈의 변화를 관찰하여 손상 정도를 분류한다. 주관적 분류 방법으로는 각막 외형의 불투명성, 홍채의 외형, 빛에 대한 반응성, 결막의 붉음과 혈 관 손상 정도, 그리고 눈꺼풀의 팽윤 등을 관찰한다. 보다 객관적인 분류 방법으로는 손상된 조직에 쉽게 흡수되는 특성을 지닌 형광색소 fluorescein을 사용하여 손상의 정도를 점수화하여 평가한 다음 시험물질들을 서로 비교하기도 한다.

 

(3) 피부 자극시험 및 과민반응시험

 

◆ 화학물질의 국소적 독성작용을 관찰하는 더른 피부자 극시 컴은 일반적으로 일차자극, 피부 민감성, 광독성 및 감작 등 3가지 시험으로 분류한다. 특히 피부에 직접적으로 접촉하는 물질(화장품, 세제, 표백제 기타 등)의 경우에는 적절한 규 제를 위해 시험이 필수적이다.

 

▷ 일차자극시험은 백색 토끼 등부위의 털을 깎은 후 약 5cm2 넓이를 갖는 부위 두 곳을 만든다. 이 중에서 한쪽 부위는 그대로, 나머지 한쪽 부위는 피부를 가볍게 벗긴 다음 화학물질 0.5mL 또는 0.5g으로 양쪽 부위에 바르고 거즈로 덮어 둔다. 계속하여 토끼의 전신을 비 투과성 물질로 감싼 후 반창고를 붙여서 다시 23 시간 경과 후 이를 제거한다. 다시 한 시간이 경과한 다음 처치된 부분의 홍반적 병변(모세혈관의 충혈에 의해 생기는 피부의 붉은)과 부종적 병변(피하조직의 과 잉 유체 축적) 등을 평가하며 처치 부위를 48시간 후에 재평가한다.

 

이 방법은 면역계가 같은 물질에 다시 노출돼면 최초 알레르 유도 반응 용량보다 훨씬 작은 용량에서도 같은 세기의 반응이 일어나게 되 원리를 이용하는 방법이다. 이는 화학물질이 체내 단백질과 결합한 형태인 배 -단백질 결합체가 항원으로 인식되기 때문이다. 피부감작 시험에 주로 사용돼 동물은 기니아피그이며, 처치 방법은 적절한 용매에 녹인 시험물질, 용매, 그리 2,4-dinitrochlorobenzene과 같은 양성 대조 물질 등을 함께 사용한다.

 

독성시험 나은 실험동물에 일정한 간격을 두고 3일씩 2주 동안 처치한 다음 다시 한번 시험물질을 처치한 다음 발병된 동물의 수와 증상 심각성을 기초로 독성을 평가한다. 광독성 및 감작 시험은 빛(주로 자외선)과 문제가 되고 있는 화학물질이 피부에 대하여 복합적으로 일으키는 영향을 검토하는 것이다. 시험 원리는 독성물질이 너지에 의해 일시적으로 여기(excitation)된 다음 다시 낮은 에너지 상태로 나오면서 반응성이 큰 자유라디칼을 생성하고 이때 생성된 자유라디칼이 세포 거대분자들과 결합함으로써 발생되는 독성 정도를 측정한다. || 시험은 시험물질로 처치된 부위를 자외선에 의해 조사하는 것을 제외하고는 일차자극 시험법 및 피부감작 시험법과 동일하다.